3415熒光蛋白激發(fā)光源區(qū)分平板上未編輯的和假定的編輯的菌落轉(zhuǎn)化子

近日，中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所在《applied microbiology and biotechnology》期刊發(fā)表文獻，文獻中指出利用LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源進行篩選。下面是文獻摘要，文獻全文鏈接在網(wǎng)頁尾部

CRISPR/Cas9系統(tǒng)是一種強大的基因組編輯工具，目前已在一些絲狀真菌中成功應(yīng)用。但Cas9蛋白對真菌細胞存在的潛在毒性在一定程度上限制了該體系的進一步推廣和應(yīng)用。AMA1是一種來源于構(gòu)巢曲霉的自我復(fù)制因子，它的衍生載體在沒有抗性選擇的情況下很容易丟失。本研究中，我們利用基于AMA1的Cas9表達載體在無抗篩選條件下的*丟失的特性，消除了Cas9對威尼斯鐮刀菌TB01的毒性。同時，挖掘了兩個可用的用于CRISPR/Cas9系統(tǒng)sgRNA表達的內(nèi)源性Pol III啟動子(FvU6374和Fv5SrRNA)。與FvU6374(40-50%)相比，F(xiàn)v5SrRNA具有更高的單基因編輯效率(> 85%)，使用Fv5SrRNA同時編輯兩個基因的效率超過75%。利用上述建立的基因編輯系統(tǒng)，我們刪除了一個編碼丁二醇脫氫酶的基因FvBDH，獲得的突變體菌株乙醇產(chǎn)量比野生型提高了52%。本研究開發(fā)的高效CRISPR/Cas9系統(tǒng)為后期通過代謝工程推進威尼斯鐮刀菌TB01的發(fā)展奠定了技術(shù)基礎(chǔ)；同時，未來通過進一步的遺傳改造和發(fā)酵工藝優(yōu)化后，獲得的FvBDH基因編輯轉(zhuǎn)化子有望用于菌絲蛋白和乙醇的同步生產(chǎn)。

   通過熒光觀察，初步篩選了GFP基因編輯的變異體。使用手持熒光蛋白激發(fā)光源LUYOR-3415區(qū)分平板上未編輯的（熒光）和假定的編輯的（無熒光）菌落轉(zhuǎn)化子。轉(zhuǎn)化板被放置在一個黑暗的環(huán)境中。然后，打開激發(fā)波長分別為450 nm和500 nm的綠色熒光樹脂激發(fā)光源，照亮平板觀察或拍攝菌落轉(zhuǎn)化子

   LUYOR-3415RG便攜式熒光蛋白激發(fā)光源能夠觀察GFP、eGFP、dsred、Mcherry、Tdtomato等綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白的表達，我公司針對科研院所免費試用，試用滿意付款。我們在北京、哈爾濱、武漢、鄭州、海口設(shè)有代理商，如需演示，請和我們當(dāng)?shù)卮砩搪?lián)系。